purification:tev:b_protocol
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| purification:tev:b_protocol [2016/07/13 15:48] – bonnefon | purification:tev:b_protocol [2023/11/01 20:19] (current) – external edit 127.0.0.1 | ||
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| Line 5: | Line 5: | ||
| * Electrotransformation BL21(DE3) avec plasmide pTEV | * Electrotransformation BL21(DE3) avec plasmide pTEV | ||
| - | * Etalement sur boite LB agar + Kanamycine | + | * Etalement sur boite LB agar + Kan 30 µg/ml |
| * Quelques colonies prélevées pour ensemencer préculture de 100 ml de LB + kanamycine 30 µg/ml | * Quelques colonies prélevées pour ensemencer préculture de 100 ml de LB + kanamycine 30 µg/ml | ||
| - | * Culture de 3 x 1 litre de LB kanamycine | + | * Culture de 3 x 1 litre de LB Kan 30 µg/ml ensemencée avec la préculture pour avoir DO initiale de 0.1 |
| * Culture à 37°C pendant environ 2h puis à 16°C jusqu' | * Culture à 37°C pendant environ 2h puis à 16°C jusqu' | ||
| * Induction pendant 4h à 16°C | * Induction pendant 4h à 16°C | ||
| Line 26: | Line 26: | ||
| * Centrifugation 30 min 15,000 rpm à 4°C | * Centrifugation 30 min 15,000 rpm à 4°C | ||
| - | === 2.2 Ni-Sepharose | + | === 2.2 Ni-Sepharose |
| * Colonne équilibrée tampon A | * Colonne équilibrée tampon A | ||
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